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我们在用真核表达载体如pcdna3.0或者pEGFP-c1等做稳定克隆时,常常发现,在药物筛选后期(1-2周)所形成一些耐药的克隆并没有目的基因的表达,而且这些克隆占大多数,为阳性的克隆筛选造成很大麻烦。有人认为是细胞在药物筛选过程中产生了耐药,也有人认为
2012年03月15日发布人:hot_hot_hot
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不表达的话原核用诱导表达,后page电泳,后用western验证,真核做单克隆筛选,后用western验证。当然其它验证的方法也比较多。
如果是检测装没装上的话,用酶切,情况同上。 [/size],[font=仿宋_GB2312
2011年10月11日发布人:莲花白
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?每个克隆都出现这情况?[/color][/size],[size=2][color=Black]
一个很大的克隆.[/color][/size],[size=2][color=Black]
就一个克隆?
筛选过了?还是刚挑出来
2012年11月10日发布人:轰轰
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[size=2][color=Black][b]
各位细胞高手,新年好!
救救我吧:
我的细胞经转染后,G418筛选了12天,阴性对照组全部死亡,转染组出现了几个阳性克隆,再用G418维持筛选,至今已16天,现在每瓶
2012年08月11日发布人:guagua
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请教各位师兄师姐,我们实验室最近建Crispr/cas9平台,感觉敲除效率比较低,特别是后面单克隆筛选,实验室
一开始是送测序,但是做的人多比较麻烦又费时间,后来用NEB的T7核酸内切酶,方便到是很方便,但是每次筛选
2015年12月12日发布人:standup
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药物从原液到非最终灭菌的无菌水针、冻干粉针的研究到中试生产的CRO、CMO服务。有意向者可前来考察洽谈。[/size],[size=2]睿智化学,药明康德,南京金斯瑞,宝船生物这几家是比较靠谱的,其它的基本是忽悠的。这几家我们公司都曾与之洽谈过,并实地考察过的。国内这类的公司忽悠的特别多,要小心。抗体类的研发外包,从分子克隆,细胞筛选,到纯化工艺的一套完整服务,
2015年07月08日发布人:66+77
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G418,对照孔细胞全死了以后才可以将转染的细胞挑取克隆;
另外筛选的时候刚开始几天细胞死的是比较慢,后面死的就很快,要不你再过两天看看.[/color][/size],[size=2][color=Black]同意楼上的,我曾经在第9天
2012年06月24日发布人:XYZQ
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[size=2][color=Black][b]把最近一个多月来所做的工作,做了个总结,供大家一起分享,我做的是GS115表达VEGF,目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结,再与大家分享。希望大家支持,绝对原创
2024年03月17日发布人:douding66
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、冻干粉针的研究到中试生产的CRO、CMO服务。有意向者可前来考察洽谈。[/size],[size=2]
睿智化学,药明康德,南京金斯瑞,宝船生物这几家是比较靠谱的,其它的基本是忽悠的。这几家我们公司都曾与之洽谈过,并实地考察过的。国内这类的公司忽悠的特别多,要小心。抗体类的研发外包,从分子克隆,细胞筛选,到纯化工艺的一套完整服务,基本都是上百万
2014年08月07日发布人:周伯通pp
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按照说明书上说的要做1:10传代,这个1:10的意思是不是把转染后的1孔细胞消化之后铺到10个孔中?
2因为我只有24孔的板,没有其他的板,那么在传代之后24h之后加入G418筛选,假如克隆出现了,该怎么办呢?
3 还有这个1:10传代
2012年08月16日发布人:fei1226com