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Formazan结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。
二、试剂材料准备与实验仪器
1)对数生长期细胞
2)受试因素(药物)
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2012年01月14日发布人:薄荷侠
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二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。
二、实验步骤(实用于贴壁细胞)
1)收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,分于96孔板,每孔180μl,3000-10000个/孔
2012年07月20日发布人:wmp1234
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,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。
二、试剂材料准备与实验仪器
1)对数生长期细胞
2)受试因素(药物)
3)MTT:以PBS配制成5mg./ml,抽虑除菌,保存在4˚C
4)DMSO
2015年08月12日发布人:flower@@
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免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。
二、实验步骤(实用于贴壁细胞)
1)收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,分于96孔板,每孔180μl,3000-10000个/孔。
2)置37℃、5%CO2温箱培养使细胞
2015年10月19日发布人:mogu
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变化,我要是每次取出细胞就做,相当麻烦,因为酶联免疫检测仪器在别的科室,特别是前面几组,人家不上班。
我能不能,在加入dmso后,晶状物溶解后,给它放在冰箱了,等10天后,结果全部出来,在放在一起测量。
谢谢,请大家多提宝贵意见![/b
2012年06月09日发布人:kuohao17
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胶染色,还有小部分未转出。)
4, 免疫检测:
封闭:5%脱脂奶,室温2h(或者4度过夜)
一抗:cell signaling的一抗,1:1000和1:200都做过,室温1h、2h、3h或者过夜都做过。TBST洗10min+5min×2
二抗:1:1000和1:200都做
2013年05月30日发布人:ukonptp
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/ml,即0.5%MTT),继续培养4 h。
6)然后吸掉上清,每孔加入150 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。
7) 同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度
2012年08月27日发布人:8s5g
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可以判定是否偶联成功。[/color][/size],[size=2][color=Black]
我用的是紫外检测方法,偶联物和原多肽,KLH的紫外图谱均有所不同,不过没法算偶联率.[/color][/size],[size=2][color=Black]
只有免疫检测血
2013年11月27日发布人:bhka
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是否偶联成功。[/color][/size],[size=2][color=Black]我用的是紫外检测方法,偶联物和原多肽,KLH的紫外图谱均有所不同,不过没法算偶联率.[/color][/size],[size=2][color=Black]
只有免疫检测血清的
2013年08月08日发布人:shanzhapia696
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?
会不会影响后面的免疫检测?
2.我第一次染凝胶后转膜,用的是45伏特,湿式转移,6个小时,结果膜上什么都没有,而胶上的条带还很清楚;
3.第二次电泳时没有染胶,直接电泳的,也是45伏特,7个小时,转膜后用丽春红染膜,考马斯亮
2013年08月10日发布人:PINK