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海马神经元凋亡,想请教你们怎么把海马组织制成单细胞的?
我是做纹状体NSCS培养的,也需要制备单细胞悬液,我想虽然我们的目标细胞不同但制备细胞悬液的目的是相同的,所以将我的方法介绍如下,望批评指正、相互交流。
1、取材后将组织块置于
2012年06月09日发布人:biabiade
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再消化制成单细胞悬液并加入transwell上室,再温箱培养6-12小时,有的超过24小时,有的却是4小时便可,具体根据细胞类别而定。
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2.同样研究药物抑制方面,园子里战友经验是细胞悬液和药液一起加入小室,比如实验组是90μl
2012年01月17日发布人:loli
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细胞形态不明显,细胞贴壁性不牢固,不表达HBV,消化时间相对于普通的上皮细胞稍长,很难制备单细胞悬液,所需培养基为MEM+10%胎牛血清。
如果你手里的HepG2不符合以上一点,那么你手里的HepG2的真实身份该值得怀疑了。
下面来张
2015年06月09日发布人:NBA
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[size=3][color=Black][font=黑体]
用组织制成单细胞悬液后作出的结果,检测了BRDU和nestin,各位前辈看看双标的结果怎样?
[/font][/color][/size],[quote]原帖由 [i
2012年03月28日发布人:join
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][color=Black]
HepG2用lipo2000在我们实验室做的转染效率很高的,可以到70-80%,不必担心。不需要用电转,磷酸钙法也可以有40-50%的
操作上主要注意:
1,细胞铺板时的状态很重要,应该在铺板前尽量消化为单细胞悬液
2012年04月29日发布人:qhyu
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1ml,75ml培养瓶2ml),置于37%培养箱温育1min。
3. 镜下观察,发现胞质回缩、细胞间隙增大迅速加入含血清培养液终止消化。
4. 轻柔吹打瓶底细胞脱落,并吹打形成单细胞悬液。
2012年10月14日发布人:DNA
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2ml+200ul溶血素(BD公司)]的混合液中,15min;离心1000r/minX3min,去上清,加入试剂盒中的结合缓冲液250ul,摇匀、过滤,制备成单细胞悬液。后面的步骤就是技术员给我做的了。
试剂盒是晶美的,流式细胞仪是BD的。
我
2012年06月24日发布人:kuohao17
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[size=2][color=Black][b]
欲做流式分析细胞周期,细胞太稀可能数目不够;太密单细胞悬液制备不好。以前尝试过,用力吹打后肉眼感觉可以,但是加入冰乙醇后就产生许多白色絮状沉淀!请高手指教!谢谢先![/b
2012年01月18日发布人:分子式
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=Black]
主要是消化的关系,要是胰酶活力高,消化时间合适, 对大多数培养细胞来说很容易很得到单细胞悬液; 所以要自己摸条件, 总结或借鉴经验,[/color][/size],[size=2][color=Black]
同意楼上的
2012年11月03日发布人:flower-201
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=2][color=Black]你消化的有点过了,消化的正好应该是在显微镜下观察大部分细胞都分开,细胞没有贴壁时的形态,但细胞还不能飘起来。
每次传代最好离心一次,然后吹打,碎片就会很少了,至少肉眼看不到。
单细胞悬液最好用个细胞筛(如
2012年02月08日发布人:vivian4123