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统一回答.如果有重复的问题,或者本帖的回帖中能自行找到答案的问题不会作答。
现在将每一页的主要问题整理一下
不建议用普通PCR来验证定量引物以及摸索定量的反应条件。
Page1:
1.做目的基因表达量分析的简易小流程
2011年10月16日发布人:潇湘子
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微升
25mM Mg+ 4微升
10微mol Primer各1.8微升
Taq酶 0.2微升
模板 0.5微升
total:25微升
反应条件:95度5分钟,
95度 20秒,55度 20秒,72度 30秒,40个循环
2011年09月23日发布人:楚留臭
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CCCC-3’
R: 5’-CACT CTTC TTCC ATGT TCCC-3’
由于文中未写出反应条件和目的基因大小,敢请诸位指导一二,究竟应该是多少bp?
万分感谢![/size],[size=2]
总长度应为643bp,见附件,两个
2016年01月07日发布人:泡泡
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请问各位善良的才子才女们:已经末端是NHS酯的药品和氨基的反应条件是什么?(温度,时间,搅拌,溶剂等)
具体情况是这样:购买的PEG的药物(固体)末端已经是NHS酯 ,想和带有氨基的纳米颗粒, 结合在一起。 看文献中都
2014年03月11日发布人:ass
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][/size],[size=2]
挨老板骂算什么呀,毕不了业才是大事哦。
楼主你有更详细的资料吗?比如目的基因序列,引物序列,重叠序列,反应条件等等。[/size],[size=2]
有,两段目的基因分别是
gaa
2015年07月02日发布人:zhezhe
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0.1mM Taq 1 U
反应条件: 95 度 5 分
94 1 分, 56 度 50秒, 72度 50秒 35 循环
72 5分
于2% agarose gel 150V电泳
结果 有目的带,同时出现500bp 300bp
2011年10月08日发布人:百分比
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,Ct值都在25、26左右呢。他用的是常规的realtime
PCR条件。用SYBR GREEN需要什么特殊的反应条件或者什么反应体系吗? [/b][/font][/color][/size],[size=4][color=DarkGreen][font=仿宋_GB2312]SYBR green仅仅是染料,不需要加入特殊物质,用普通PCR地反应条件即可,你
2011年10月05日发布人:tieshazhang
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][color=Black]分析:
原因可能是多方面的,举几个吧!
1,引物设计不合理;
2,模板量太少;
3,Taq酶失活或反应条件不太合适;
自已将整个过程好好考虑。最好是在师兄的成功反应下再结合实验与看书摸索条件
2011年10月08日发布人:sunshine039
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不?,你是做巯基乙酸甲酯?可以,粗品可达百分之八十,看你反应条件,控制。,那用哪种溶剂比较好呢?因为是非均相的,是不是要用均相催化剂啊?谢谢啦,你用醇作溶剂也行,当然很多工业化生产根本不用,做硫醇直接就水溶液,一样,反应过程中注意
2014年06月23日发布人:shuishui
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[color=Black][size=4][font=宋体][b]PCR技术概论(为刚开始做PCR的朋友准备) [转自丁香园论坛]
PCR技术简史
PCR技术的基本原理
PCR反应体系与反应条件
PCR反应特点
PCR
2011年08月22日发布人:阿拉蕾