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最近在做原核表达,包涵体。以前也做过,但经验不多。从园子里也学到不少。一点失败的教训以及纯化过程中的体会,贴出来与大家共享,同时希望得到同行们的指正
1. 首先介绍一下背景
2013年04月20日发布人:ukonptp
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2009年11月17日发布人:小猪妈妈
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[size=2][color=Black][b][求助]单个核细胞分离出现很多小颗粒
各位大家好,我们用Ficoll分离液分离脐血单个核细胞,稀释脐血以2:1的比例加于分离液上,2000rpm,离心30mins。取中间白膜层,用
2011年12月15日发布人:moonlight45
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[size=4]请教为什么液质联用的质谱图中的质谱峰不像气质联用的EI源得到的质谱峰那样干净?EI源得到的质谱峰往往是一根一根的,而液质联用的ESI或APCI源的得到的质谱图中的质谱峰往往是一堆峰,一个最高峰下面还有两到三个小峰甚至更多
2008年06月05日发布人:100sjl
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麻烦大家详细讲讲清洗核磁管的方法,谢谢!,用滴管加满洗液,过夜后倒出,用自来水冲洗干净,再用蒸馏水过一遍,倒置烘干,先用丙酮-后甲醇--超纯水交替洗3-5便烘干即可,[quote]原帖由 [i]maxiaoqing2011[/i] 于
2011年02月28日发布人:maxiaoqing2011
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的同学 给个参考条件 谢谢!,原本就是甲硫醇钠的水溶液 我是把水溶液除水之后 用甲硫醇钠固体来进行反应得 有水的话 应该会降低亲核取代反映的活性把 而且我发现有水的话 醛基貌似会还原掉,原本就是甲硫醇钠的水溶液 我是把
2014年06月09日发布人:风往尘香
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GFP融合蛋白,803细胞爬片,lipo2000转染48小时,荧光显微镜拍照。
现在观察到的蛋白是定位在核内,但是有两个问题需要大家帮忙看看
1.蛋白荧光强度不错
2012年04月29日发布人:987789
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刚做核磁,很多地方不懂,比如核磁管的清洗,那么细一玻璃管,加水都倒不出来,不知怎样才能清洗干净?,在烧杯中用乙醇将核磁管浸透超声20分钟,再换成丙酮超声20分钟(超声仪放通风橱),再用“甩手法”去除残余脏溶剂,
“甩手法”操作如下:十几
2009年10月22日发布人:小莲
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[size=4][size=6][size=4]我把核磁管不小心直接放入了,没有套套子。我有以下问题需要请教各位,特别是有如此经验的师傅们。
1.空压是打开的时候放入的,会不会破在里面,污染探头啊??
2.我现在要如何取出?是不是把
2011年09月06日发布人:ting
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是以包含体还是可溶性的形式表达:超声波破碎,分别收集菌体裂解上清液和沉淀,进行SDS-PAGE电泳,考染即可确定。如果为可溶性表达,那么你很幸运啊!如果为包含体,你还要努力,改变表达条件(原核表达手册上有详细的指导),获得可溶性表达。否则,要想通过变复性获得有生物活性的融合蛋白,工作量很大,而且效果不佳!
2、获得可溶性表达后就很容易了!按照标准
2013年06月29日发布人:mingming0638