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[size=2]向各位请教~
我的基因全长1638左右,分别以DNA和cDNA为模板进行pcr,胶回收,连接19T载体,转化大肠杆菌感受态。
上图是DNA为模板的基因,菌液PCR
送华大测序失败,第一次是原始菌液(命名为D4
2015年01月13日发布人:chuntian1983
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我直接用牙签蘸了点菌放在PCR体系里,结果没有P出来,是什么原因啊?[/size],[size=2]
用牙签从平板上挑取单菌落,放入加LB的EP管中,摇菌到一定浓度,然后在取菌液做PCR[/size],[quote
2015年12月30日发布人:蒲公英
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此方法可能很多师兄师姐们都在用,只是当时的确没有找到相关的详细说明,学弟再次把自己摸索出来的一点心得写出来,高手就多多指正,没做过的就相互学习下,见笑)
由于课题组所需,我需要构建数量可观的真核表达载体和融合载体
起初我也查到相关菌落pcr的文献,和导师商量
2015年03月10日发布人:queen
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把PET28a转到DH5α里平板培养后挑单克隆过夜培养,菌液pcr检测全是阳性。然后我把培养液每管加至5~6ML(是不是有点多了?)再过夜培养提质粒。提质粒的时候加了3ml菌液,用天根试剂盒提的,回收后竟然浓度超低。还有不到10ng/ul
2016年03月26日发布人:hcy517
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[size=2]这是前段时间跑的菌液pcr,在某几个泳道里隐约有几条带,但是不是很明显,非常的淡,请问,这是不是引物特异性不好的原因啊?[/size],[size=2]修改一下PCR反应条件
最好是退火温度,做个梯度PCR试试
2015年02月15日发布人:bamboo16
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最近要购买质粒表达包涵体,与某公司的技术人员交流。对方直接说能达到每升菌液几十克包涵体的水准。这点确实让我不敢相信。之前做表达的时候一般顶多也就是一克左右的样子,也许是在下人品太糟糕
2013年04月25日发布人:zwsyrt
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求解惑,比如溶剂是水,卡拉胶的凝胶化就是卡拉胶的增稠过程吗?两者之间的关系是什么样子的?,我的理解是,其实凝胶和增稠是两个概念,凝胶化就是高分子化合物在某一个条件下发生相互交联,导致粘度增大的现象。凝胶化的最终是形成胶体物质。凝胶化可以
2023年09月16日发布人:小米粒
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为什么大肠杆菌菌液可以直接pcr?不需要先破坏细胞壁么?[/font][/size],[size=2]
这个是菌落PCR,不用事先处理菌液的,我认为PCR的94℃就能破坏它的细胞壁吧,个人
2015年04月30日发布人:birdfish
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的啊[/color][/size],[size=2][color=Black][font=Impact]
我最近也在破碎菌 ,我一开始用的200W,1S,3S,400-600次,超完后菌液仍然是乳白色,无明显变化。后来改用过200W
2014年01月09日发布人:queen
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[size=2]请各位大虾帮我分析下,谢谢各位了!!!![/size],[size=2]
你的maker都没跑好,建议你降低电流重新跑一遍,适当增加胶的浓度[/size],[size=2]这有什么好分析的,根本没跑开嘛[/size],[size=2]
Marker跑的效果不好 目的带就更不好
2015年03月11日发布人:star#room