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[/size],[size=2]我想请教一下聚合酶延伸效率的问题。一般的聚合酶的延伸效率是多少?在做pcr的时候,为什么20s就可以扩增出2K的片段?很迷惑。[/size],[size=2]
如何pcr新基因
2014年09月26日发布人:@STAR@
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[size=2]
我在文献上找到的我课题的pcr反应条件,延伸时间只有30-40秒,是在外文文献上找到的,这个时间是不是太短了?我不敢按这个条件跑pcr.
请高人指点,谢谢![/size],[size=2]我做的是甲基化pcr
2015年07月02日发布人:qhyu
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[/color][/size],[size=4]不能重新设计就试试降低一下引物浓度,调整一下体系如优化镁离子浓度或改变模板量。除此之外,形成引物二聚物的原因很多,如聚合酶是否活化,还有program,退火温度太高,时间太短,延伸时间太短都可
2011年09月20日发布人:了了
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镁离子浓度或改变模板量。除此之外,形成引物二聚物的原因很多,如聚合酶是否活化,还有program,退火温度太高,时间太短,延伸时间太短都可能是原因。[/size],[size=2]我认为应该在PCR程序中,把循环中的退火温度提高才对,避免二聚体
2015年06月03日发布人:jude
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[size=2]昨天公司来了一个人,见我在跑电泳就和我聊开了,其中他的两个观点让我大开眼界,不知道是我孤陋寡闻还是他见解新颖。下文观点中的"我"指和我交流的这个人。
观点一:在PCR的延伸这一步,绝大多数人使用72度,这些人很多是没有
2015年08月03日发布人:minran_1980
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[size=2]引物退火温度50-60度,taq酶延伸温度72度,那么taq酶延伸的时候部分引物岂不是已经熔开?我也做过一些pcr,但没有想过这个问题,请各位高人帮忙解答。
我看到有人说引物Tm值不要超过72度,这是为什么呢,我觉得
2014年09月25日发布人:四福晋
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等多条杂带。
我将体系调整了,Mg 1.0mM 其余各项未变。
退火温度改为58 度,延伸时间改为40秒。
同样条件下电泳,结果没有太大的改变。
不知道这是什么原因?
请各位大虾帮帮小弟。
小弟感激不尽!!!!!! [/b
2011年10月08日发布人:百分比
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[size=3][color=Black][font=楷体_GB2312][b][求助]关于始终存在的非特异扩增
大家好!我有一头疼的问题。我的目的片段210bp,但我无论是提高退火温度,还是改变引物量,模板量,酶量或延长延伸
2011年10月11日发布人:中国特色
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延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量可增加一倍(理论上)。
两步PCR其实就是
2011年09月21日发布人:HOT兔
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74.8一个63.7该怎么选择退火温度,还有要批的东西在1600bp以上,延伸时间该有多长啊[/font][/size],[size=2]
通常以连续与模板互补的碱基个数用以下公式计算:
Tm=(A+T)X2+(G+C)X4
然后再减5度
2015年11月11日发布人:PCR