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[size=2]引物退火温度50-60度,taq酶延伸温度72度,那么taq酶延伸的时候部分引物岂不是已经熔开?我也做过一些pcr,但没有想过这个问题,请各位高人帮忙解答。
我看到有人说引物Tm值不要超过72度,这是为什么呢,我觉得
2014年09月25日发布人:四福晋
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[size=2]各位大侠,本人做pcr,两个引物Tm值相差甚大,一个66°,一个59.7°,PCR结果一直出不来,请教各位应如何解决这一问题?多谢指点![/size],[size=2]引物一开始设计就出问题了,两个引物TM应该相差不要超过
2015年04月28日发布人:fox_79
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[size=2]请问各位大虾PCR时TM是看TM(1M Na+)还是TM(0.05M Na+)?P时是不是将其降5-8度?目的基因P不出来只有二聚体出来,是不是引物没设计的好的原因?我该怎么办啊?[/size],[size=2]我也发现
2016年02月09日发布人:bongte
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[size=2]请问大家 引物的Tm值和退火温度之间有什么关系 如何选择引物的退火温度啊[/size],[size=2]
退火温度一般是引物的Tm值减去5[/size],[size=2]Tm值减去3-5度[/size],[size=2
2014年09月01日发布人:sistis
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[size=4][color=Blue][font=楷体_GB2312]引物的Tm值计算要不要包括不与模板配对的碱基啊 [转载]
由于在引物的5‘端设计酶切位点,但是这部分碱基不与模板配对,那么在计算引物的Tm值时还要不要把这些
2011年09月20日发布人:mooon
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[size=2]
引物Tm值是58度,扩增目的条带217bp,分别在退火温度55度和57度跑PCR,内参条带很清楚,可是没有目的条带,而是引物二聚体,我该怎么办?再提高退火温度还是降低退火温度,请高手指教啊,十万火急!谢谢![/size
2015年11月10日发布人:wiwi
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],[size=4][color=Black]那是官方给的引物,Tm值太高啦,能不能用? [/color][/size],[size=4][color=Black]拜托帮忙看看吧,pm了好多都石沉大海,不应该很难吧!! [/color][/size
2011年10月22日发布人:小困
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,目的基因和杂带有很模糊,什么也看不见了,很是郁闷![/size],[size=2]看来要用降落(TD)-PCR了,就是PCR开始时的退火温度高于Tm值,随着循环的进行,退火温度逐渐降到Tm值并最终低于这个水平。首先在高于引物Tm值的温度扩增几个循环,然后把退火温度逐渐降到两引物的Tm值附近,在随后的循环中,对退火温度进行梯度实验。这样能保证第一引物-
2016年02月09日发布人:了了
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的看看有不有,结果还是没有条带,做了touchdown 从60度降到45度,引物的tm值是50度,(引物合成公司给的),但是用primer5分析tm是58度.很奇怪.怎么办啊?换了很过酶都没有用.
后面分析模板是属于高GC含量的模板
2015年02月15日发布人:www.1
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PCR条件引物Tm值等发上来让大家讨论。[/size],marker不是很清晰,可能和胶有关系,电泳相关的溶液都重新配了试试,PCR没见到有明显条带, 暂时没法知道PC ...
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2015年01月13日发布人:33号