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分析可能原因:
质粒转化DH5a可以,质粒应该没有问题,同理我的转化步骤也没有问题;貌似原因就归结到感受态细胞上了,但是为什么换了两家公司的感受态都不行呢?
问题补充:昨天用公司的感受态自己做了新的感受态,方法如下:将100微
2013年12月19日发布人:taoshengyijiu
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.[/color][/size],[size=2][color=Black]
我正在用,但发现有很多问题,大家以后购买时还是要多方考虑,一个是那个载体的量好象不足,二个是那个感觉态细胞由于长途运输普遍感受效率下降,有的基本是没有.[/color
2014年03月07日发布人:idoww
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[size=2][font=黑体]
大家好,我先用pcr扩增出我的目的基因,我用玻璃奶回收的目的产物,之后用PMD18-T载体16度连接过夜转化到, 但是连接着做了四次板上一个菌也没长,最后一次我做了6个转化,连接酶、载体和感受态细胞
2015年02月16日发布人:cwcwcww
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pET-28a载体,转到BL21感受态细胞中表达,暂时还没有检测蛋白。请问楼主是用什么方法知道你的蛋白没有表达的呢[/color][/size],[size=2][color=Black]
1、测序,确定读码框无问题
2、连到真核表达载体上
2013年06月18日发布人:qianqin1977
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0感受态细胞自身含有质粒吗? 求指教 。。。。。。。,查找该宿主菌基因型,看看就知道了,呵呵,有些致育因子等F0,F`,不要忘记 你用的这些商品化的宿主菌都是改造过的,尤其是表达宿主菌,为了改造其性能,有些是以质粒的形式添加进去的,这也
2015年08月31日发布人:xiaoxiaojinglin
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0感受态细胞自身含有质粒吗? 求指教 。。。。。。。,查找该宿主菌基因型,看看就知道了,呵呵,有些致育因子等F0,F`,不要忘记 你用的这些商品化的宿主菌都是改造过的,尤其是表达宿主菌,为了改造其性能,有些是以质粒的形式添加进去的,这也
2016年03月16日发布人:冰激凌
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,不过无论 怎样也诱导不出来 ,如果找到了诱导不出来的原因 ,麻烦分享一下[/color][/size],[size=2][color=Black]
IPTG失效了吗?尝试换个感受态细胞,或载体。[/color][/size],[size
2013年11月16日发布人:8黑眼圈8
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0感受态细胞自身含有质粒吗? 求指教 。。。。。。。,查找该宿主菌基因型,看看就知道了,呵呵,有些致育因子等F0,F`,不要忘记 你用的这些商品化的宿主菌都是改造过的,尤其是表达宿主菌,为了改造其性能,有些是以质粒的形式添加进去的,这也
2015年05月09日发布人:小女人@
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问题,我的蛋白还要小点,不过无论 怎样也诱导不出来 ,如果找到了诱导不出来的原因 ,麻烦分享一下[/color][/size],[size=2][color=Black]
IPTG失效了吗?尝试换个感受态细胞,或载体。[/color
2013年07月29日发布人:张先生
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[size=2][color=Black]
这个基因去年我做的时候表达量很高,当时就放下去做别的了,而现在再重新做时蛋白表达量非常低,不知是什么原因。现已排除的原因:抗生素;培养基;基因应该也没问题一直冻存。感受太细胞不确定是否有问题
2014年03月03日发布人:大白菜