-
值很小(不超过0.2),我用的酶浓度最大的有20U/ml,底物也是20mmol/L。这是为什么呢?另外,还有一个问题想要请教一下。我买的酶标签上写着250IU,2.9mg,111U/mg,含79%蛋白这几个主要参数,是不是有用的信息只有那个
2016年02月10日发布人:66+77
-
[size=2][color=Black]原核表达的蛋白,四对二硫键,带有GST标签,蛋白可溶,酶切没问题,hplc纯化后无活性
请大家帮帮忙,给些建议,如何复性使得有活性
已经尝试了GSH;GSSG氧化还原体系,还有什么建议嘛?或者
2014年02月03日发布人:jude
-
[size=2][color=Black]
各位战友,我最近纯化一蛋白,先是用镍柱亲和纯化,然后用凝血酶切除his标签。切除是在室温过夜进行的,将酶切混合物加到透析袋,以去除切掉的his tag以及elution过程中的大量咪唑。透析液
2014年02月03日发布人:969
-
与镍柱结合??纯化了好久总没结果,烦躁啊,,希望各位大侠指点迷津[/font][/color][/size],[size=2][color=Black]
你的蛋白酶是不是分泌的,还是说胞内,会不会蛋白酶将标签切割了。。。。你用的是N端对吧
2013年04月23日发布人:IAM007
-
巯基乙醇,而我的蛋白正常构建中含有二硫键,是因为这个原因而使活性丧失吗?还有洗脱液中的咪唑也有影响吗?
2. 蛋白在N端带有的His标签也会影响他的活性吧!酶切之后没有先去除它就测活性会不会影响?
3. 各位应该有用过肠激酶吧!酶切之后跑电泳有酶的这条带吗?我的就没有。有时候酶切之后
2014年02月15日发布人:seven7
-
[size=2][color=Black]目前我在表达一个26k左右的蛋白,pET32a载体,可溶性表达,带有Trx标签,500mM咪唑,20mM磷酸盐,PH 7.4洗脱,因为要做EK酶切,打算把体系置换为磷酸盐缓冲体系,然后过SP去除
2013年07月31日发布人:quiqui008
-
[size=2][color=Black][font=黑体]目前我在表达一个26k左右的蛋白,pET32a载体,可溶性表达,带有Trx标签,500mM咪唑,20mM磷酸盐,PH 7.4洗脱,因为要做EK酶切,打算把体系置换为磷酸盐缓冲体
2013年11月21日发布人:花想容
-
用的是PET32载体吧,您的表达载体上应该还含有trombin酶切的位点,EK会非特异性的切割trombin,您Tricine胶14.4-21.5之间的那个酶切后的粗带应该是trx标签,下面的那条带应该是您的目的多肽,在Trx标签和融合蛋白之
2013年11月15日发布人:iii_ii
-
][color=Black]老师:
您用的是PET32载体吧,您的表达载体上应该还含有trombin酶切的位点,EK会非特异性的切割trombin,您Tricine胶14.4-21.5之间的那个酶切后的粗带应该是trx标签,下面的那条带应该是您的目的多肽,在Trx标签
2013年07月27日发布人:如影随形
-
[size=2][color=Black][font=黑体]做了快俩月的酶切了,要崩溃了。泳道1是酶切前的GST融合蛋白,泳道2是酶切后的,只剩下GST了,我的目的蛋白哪里去了,应该在marker从下往上数第二和第三条带之间。不断的调整酶
2013年05月31日发布人:nvdabing