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我在做蛋白诱导,载体是pET32a,目前诱导温度是37度,IPTG最大浓度到5mmol/L,但是诱导结果不太理想,主要是量比较小,请问大家,IPTG可不可以加大浓度呢?它的作用原理是什么呢
2023年09月23日发布人:@STAR@
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,上清里的很少。之后做了很多的优化,包括调整IPTG的量,改变诱导温度和时间(但是没有低温摇床,诱导温度最低只能是室温),改变加诱导剂前菌体OD,目的就是想提高上清蛋白的表达量,但是效果不明显 --------考虑到GST蛋白变性复性的复杂
2013年06月03日发布人:摆渡客
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],[size=2][color=Black]楼主是在是多少温度诱导表达的?我们都是20-25度诱导。[/color][/size],[quote]原帖由 [i]yes4[/i] 于 2013-7-22 13:43 发表 [url=http
2013年07月22日发布人:queen
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楼主是在是多少温度诱导表达的?我们都是20-25度诱导。[/color][/size],[quote]原帖由 [i]jujuba[/i] 于 2013-11-12 21:49 发表 [url=http
2013年11月12日发布人:流星锤
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我们自己构建了原核表达系统PGEX-4T-1/cypD,经过测序检查表明该系统构建没有问题,然而摸索了快一个学期了,从菌液量,IPTG浓度(0.2 0.6 1.0mM)三个梯度,诱导温度
2013年06月05日发布人:sunshine039
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我现在在做一个跨膜蛋白的原核表达,载体是PGEX-4T-2,膜蛋白大小是64KD,菌株:BL21,我改变了诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度,但仍然没有表达,测序证实读码框是正确的。 同时空质粒
2013年10月27日发布人:爱老虎游tt
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1.同一温度(如37度),同一IPTG浓度(1nM),不同诱导时间(2-8h),看哪个时间表达量最高.
2.固定IPTG的浓度,一般终浓度:1nM,改变诱导温度,看哪个温度表达最高.
3.固定
2014年07月07日发布人:mybioon
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[size=2][color=Black]做了个GST融合蛋白,去年诱导表达时上清中表达量很高,今年重新活化后诱导表达,发现沉淀中量相当高,而上清中的量很少,降低温度和诱导物后过夜诱导,效果也不理想,不知道是何原因?
哪位高手帮忙解决下
2014年02月03日发布人:红袖添香
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。问了同事,他们说可能是温度诱导条件不好控制。
后来把基因从pbv220上切下转到ptha质粒上,酶切鉴定已经正确克隆到ptha上了。用IPTG表达 设空ptha对照。 对照表达了融合蛋白但是目的基因没有表达也无融合蛋白产生。
该蛋白大小为
2013年11月17日发布人:flyxx05
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走完SDS-PAGE,染色、脱色,望眼欲穿地看着那些兰色的条带,经常遭到当头一棒。
2)乱棍打枣入门篇
开始总结一些规律,那就是尽可能收集各种不同特点和诱导方式的载体和各种特点的宿主菌。融合表达,非融合表达,温度诱导,IPTG诱导
2013年10月10日发布人:nut6694