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求助!蛋白的点杂交。
只能搜到DNA和RNA的点杂交protocol,求教如何做蛋白的点杂交。
请各位指教,谢谢![/color][/size],[size=2][color=Black
2013年05月11日发布人:bohe221
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1 western 蛋白是通过加热煮沸和loading buffer 中SDS变性的,当你试图通过点杂交来摸索条件
2013年05月08日发布人:popo520
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45-50分钟,转膜后,可以很清楚的看到maker。但是用丽春红染色,没有看到蛋白条带
4,5%的脱脂奶粉,配方1g奶粉加20mlPBST,37度封闭2个小时
5,孵育一抗,按照点杂交的结果两个抗体均使用1:200的浓度,每张膜上加
2013年12月16日发布人:youyou99
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1一般20KD的蛋白转膜用0.22微米的膜。
2转膜结束,用丽春红和考马分别染膜和胶,看看是否转膜成功。
3抗体可以用点杂交来判断有效性和滴度。[/color
2014年03月18日发布人:ssonglikihi
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,用不用再诱导?有没有其他要注意的事项??[/color][/size],[size=2][color=Black][font=黑体]
那就要看无诱导状况下的表达量能否满足你的需要,以及诱导与否影响表达的程度。
另外,为验证是否是你的目的蛋白,直接做个点杂交可能更快速省时。
下面一步就是纯化啦!
GOOD LUCK![/font][/col
2014年04月12日发布人:pou
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。多抗不如单抗专一性高但更容易得到结果。
4、简易的WB——“不知道是否有表达,比如抗体少还要摸条件(稀释度),可以用剪膜剩下的边角料来先做几组点杂交摸条件,省点时间省点试剂”
5、WB中Tween-20的作用:
吐温是一种
2013年06月07日发布人:xingyi08
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[size=2][color=Black][font=黑体]本人已完成酵母双杂交实验,欲与同道们交流各自的经验,不知大家有兴趣吗?[/font][/color][/size],[size=2][color=Black]
相关疾病
2015年05月14日发布人:北国毛毛雪
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抗体浓度高.建议你把两种抗体都重新做下点杂交,一抗可以1:1000 1:1500,1:2000,1:2500,1:3000......二抗1:10000,1:15000,1:20000......选择刚出现信号的前一个浓度或者就是这个浓度
2014年05月29日发布人:bongte
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识别。多抗不如单抗专一性高但更容易得到结果。
4、简易的WB——“不知道是否有表达,比如抗体少还要摸条件(稀释度),可以用剪膜剩下的边角料来先做几组点杂交摸条件,省点时间省点试剂”
5、WB中Tween-20的作用:
吐温是
2013年10月06日发布人:zhy平平
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检测方法是采用一些已有的成熟技术,如限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)、DNA测序、单链构象多态性分析(SSCP)、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交(ASO)等。
但是,
传统的RFLP只能对一部分含有现成酶切位点的多态位点进行分型
2015年10月09日发布人:铜雀