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],[size=2]OLIGE。6软件就可以验证引物的特异性。。如果存在同源性你可以BLAST一下。我不知道你的非目的条带是指什么?如果在100BP一下的应该是引物二聚体。。做普通PCR影响不大。。荧光定量的就不能有任何非目的条带。。我建议你提高
2015年06月03日发布人:memory
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,可是B1就说不过去呀,而且仔细看貌似有几个还不止一条带,那只有是引物特异性不强,不同菌株进化距离或突变咯。另一点,如此多引物二聚体得改善一下PCR反应体系以及退火温度![/size],[size=2]
菌落鉴定,出现这种情况很常见啊,跟
2015年02月16日发布人:INK
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[font=仿宋_GB2312][b][size=4][求助]检测单个碱基突变的PCR条件如何优化?
本人用PCR方法检测糖尿病小鼠的db基因,该基因的一个碱基由正常的G突变为T,设计两对引物,其中一端为共同引物,而另一端引物
2011年10月11日发布人:WHO?
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[size=2][color=Black][font=黑体]
我做了三周的甲基化特异性PCR了,可用修饰完的DNA做模板,甲基化、非甲基化引物都扩不出来,而野生型引物确能扩出来,引物设计应该没问题,我现在高度怀疑是亚硫酸盐修饰有问题
2016年04月07日发布人:小荷尖尖
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求大神指导!
我要做的是讲质粒进行定点突变,质粒大小为4800 bp,一共用了两对引物进行pcr。酶是NEB的Q5高保真聚合酶,变性温度是98℃,退火温度是53℃,条件都是按照酶的试剂盒上的条件来的。但没有P出来
2014年09月21日发布人:bring
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或者glycine betaine
后面一种网上介绍的,我们实验室木有用过。。。
但是DMSO似乎会增加突变。。。[/size],[size=2]你指的是非特异性扩增吧,提高退火温度呀,不建议加入DMSO,如果是扩增基因后续
2015年04月01日发布人:蒲公英
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我做了三周的甲基化特异性PCR了,可用修饰完的DNA做模板,甲基化、非甲基化引物都扩不出来,而野生型引物确能扩出来,引物设计应该没问题,我现在高度怀疑是亚硫酸盐修饰有问题,不知用国产的亚硫酸氢钠和对苯二酚(北京化学试剂
2016年03月03日发布人:newway
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[size=4][color=Magenta][font=楷体_GB2312]TAQ酶的突变率,我的担心 [转载]
大家好.我现在在做一个665BP大小的片断,我本用PFU酶做,去怎么也做不出来,所以我想改用TAQ酶做,可我听说
2011年09月22日发布人:头发很短
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部分为突变碱基,绿色部分为我的特异性引物)
不知多出来的序列是怎么来的,我想可能是用试剂盒做pcr纯化时未纯化干净,有引物残留,导致具有平末端连接活性的T4连接酶将引物连接到载体上了。可是PCR产物纯化试剂盒对50bp一下的片段没有回收
2015年04月30日发布人:moonlight45
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=2]然后从新跑了次pcr之后,从左到右1-15号目标条带下面开始出现非特异性带:[/size],[size=2]始以为是偶然现象,然后是重新pcr,条件没变,如下:[/size],[size=2]现在的问题是:目标条带下有非特异性条带
2014年09月24日发布人:jiushikeshui371