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新手做qRT-PCR,迂到困难,请各位战友不吝赐教,不胜感谢!
质粒转染细胞后提取总RNA,反转录得到cDNA做模板,SYBR green法定量PCR,但发现内参(beta-actin)的Ct值高于目的基因的Ct。即
2023年02月24日发布人:woshi
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现在大部分厂商的ICP光室全部采用Ar或者N2气进行吹扫,以此消除空气等对紫外波段的吸收,但是光室一般体积都较大,一般厂商使用的吹扫气流量都较小,这样怎么能保证光室吹扫的干净呢? 如果吹扫不干净就进行测试,必然会带来测试结果的
2015年04月17日发布人:大学习
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环扫和低真空都号称能不喷镀就直接观察不导电的样品,哪个更好? 对维护有无特殊要求? 环扫和低真空现在买的都很多了, 但不知用下来实际效果如何.,两个是一样的,只是电镜品牌不同,叫法不一样。
环扫是FEI的专利,低真空是LEO的特色吧
2010年06月12日发布人:物联网
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[size=2]小弟最近在做荧光定量PCR,发现无论是actin还是目的基因的CT值都很高(30多),目的基因30多也就罢了,actin不会这么高啊! 我先后做过以下调整:
1、增加模板浓度,稀释10倍、5倍、2倍,不稀释的都试过
2015年07月03日发布人:铜雀
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气相色谱中,有一气路是隔垫吹扫,但不知具体有什么作用?,把高温下隔垫的挥发物尽可能的吹出,从隔垫吹扫出口放空,以避免这些隔垫挥发物质进入色谱柱,隔垫吹扫功能大大减少了隔垫上的吸附物和隔垫流失物所产生的干扰,吹扫进样口隔垫的样品残留。,楼上
2011年09月03日发布人:shenbj
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据roche一位工程师说样品扩增Ct值超过33个cycle就没有意义(没有意义具体是什么概念也不明白)了,定量标准品最低浓度的也要Ct在33以上,请问大侠是否有道理?为什么?有公式可以推导么?好像很多临床样本定量结果
2015年07月01日发布人:黄花菜
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表达的改变,RT 和real time PCR 的kit都是TAKARA,PCR结果让我更是糊里糊涂,内参的CT值(30~33)竟然比所有的基因ct值(28~32)都高,不知道什么原因,也不知道哪步出错了.荧光定量PCR完我把所有的孔拿回来
2015年12月04日发布人:bring
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[color=Olive][size=4][font=楷体_GB2312][b]请问荧光定量(相对定量)比较Ct中如何计算扩增效率[转自 丁香园论坛]
我用 Analysis of Relative Gene
2011年08月24日发布人:还是孩子
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我是做荧光定量的新手,今天发现,Ct值都很大,超过30,且溶解曲线的峰值出现在60-70之间,扩增片段不超过200.不知道为什么,跑琼脂糖电泳后发现均有带,如果是表达量少的话,这样的结果可靠吗?[/size
2016年01月08日发布人:yes4
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首先介绍一下背景:
我做的是人群,分为暴露人群和对照人群,然后采集其外周血取淋巴细胞测相关基因的表达。
RT-qPCR得到的结果包括Ct,ΔCt。由于暴露人群和对照人群只是大体的分组,并未进行一一配对,所以无法得到
2015年07月01日发布人:PCR