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[size=4][color=Magenta][font=楷体_GB2312]TAQ酶的突变率,我的担心 [转载]
大家好.我现在在做一个665BP大小的片断,我本用PFU酶做,去怎么也做不出来,所以我想改用TAQ酶做,可我听说
2011年09月22日发布人:头发很短
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。载体是novagen公司的pET22b,Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3,是一个蛋白降解酶突变菌株,也就是说是一种优化表达菌株。
2. 第一次失败。第一次做诱导的时候,重复了很多次,但总是诱导不出来
2013年04月20日发布人:ukonptp
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碱基突变,只好重做,请教哪种Taq酶保真度高?应该用哪种?一般的高保真的Taq酶不能直接做TA克隆吧,呜呜,该用哪种呢?????急急急急 [/b][/color][/size],[size=4][color=Black]建议使用Qiagen
2011年09月16日发布人:mamamiya
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求大神指导!
我要做的是讲质粒进行定点突变,质粒大小为4800 bp,一共用了两对引物进行pcr。酶是NEB的Q5高保真聚合酶,变性温度是98℃,退火温度是53℃,条件都是按照酶的试剂盒上的条件来的。但没有P出来
2014年09月21日发布人:bring
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都是由聚合酶造成的吧,若是产物跑胶回收时在紫外下暴露时间过长,也很容易造成突变的。[/size],[size=2]
我们都是用PFU,实在p不出来的东西才用LA,有时候还会与PFU混用。
还有PCR循环数越多,其突变的几率越大,所以我们最多不超过30个循环。[/size],[size=2]
2015年06月03日发布人:txwuyan
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][color=Black]
我这里正好有一篇文献,和你的目的相同,用的方法是基因突变蛋白酶水解,告诉我你的邮箱可以给你发过去.[/color][/size],[size=2][color=Black]
当你确定了蛋白A和B之间存在相互作
2014年05月21日发布人:moonlight45
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[size=2]本人最近用ABI的探针做SNP,与酶切法结果比较,居然有差异!酶切结果是野生纯合子和突变纯合子在探针法上都成了杂合子,真伤脑筋。酶切法应该也是公认方法,许多高分文献都应用的,从理论上看,ABI的探针做SNP应该也没问题
2016年02月10日发布人:langlang
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做表达啊?有没有什么解决办法?先谢谢各位了!我也是第一次做表达啊。[/color][/size],[size=2][color=Black]
有突变最好别往下做,谁知道是否会影响功能?我建议你:重新扩增基因,使用质量高的taq酶,比如NEB
2014年02月07日发布人:windboy
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本人最近用ABI的探针做SNP,与酶切法结果比较,居然有差异!酶切结果是野生纯合子和突变纯合子在探针法上都成了杂合子,真伤脑筋。酶切法应该也是公认方法,许多高分文献都应用的,从理论上看,ABI的探针做SNP应该也没问题
2016年02月29日发布人:ROSE李
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(Taq DNA聚酶N-末端缺失突变体,类似于E.coli DNA聚合酶I Klenow片段)或AmpliTaq(全长的Taq DNA聚合酶)等聚合酶差;在扩增5.0-7.0kb片段时亦不比各种形式的Taq DNA聚合酶(如Ampli
2015年02月15日发布人:NBA