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][color=Black]首先你要确定你的目的蛋白是表达在上清还是沉淀,若是沉淀需进行复性,如果是上清表达的,则可按以下步骤操作:
1、细菌破碎(可以超声波、溶菌酶等方法)
参考(超声波方法:工作5.5秒,停9秒,10min/次,功率25
2013年11月08日发布人:ROSE李
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Tris-Mg缓冲液重悬,同样条件离心,再重悬于预冷的Tris-Mg缓冲液。
④ 超声波破碎细菌。
⑤ 3000g,10min、室温下离心去除未破碎细菌。小心吸取上清(含有胞质成分和细菌外被成分)。
⑥ 超速离心I:100,000g,60min
2013年04月23日发布人:abc816
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=2][color=Black]首先你要确定你的目的蛋白是表达在上清还是沉淀,若是沉淀需进行复性,如果是上清表达的,则可按以下步骤操作:
1、细菌破碎(可以超声波、溶菌酶等方法)
参考(超声波方法:工作5.5秒,停9秒,10min/次
2013年07月02日发布人:yysr238
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[size=2][color=Black]
原核表达后超声波破碎细菌提取重组蛋白,网上很多帖子都说用含有1%的
triton-X-100的PBS悬浮,然后超声的效果较好,可是我在超声时加入triton后不一会就出现大量泡沫,最终导致
2013年12月28日发布人:chengjie79
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我做一个酶催化的酯类水解反应。试了NOVOZYM 435等很多商品脂肪酶,蛋白酶,但是都没有催化结果。用的酶量应该还算大大过量(底物浓度非常低,1mM)
结果我用自己培养的细菌,用细菌破碎液来催化水解。结果在破碎液量非常大的时候才有
2010年04月23日发布人:Tara0416
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=Black]
高速离心还比水轻,强烈怀疑是油脂类物质,比如我们提取的神经组织的髓鞘等磷脂成分就是这样的。。[/color][/size],[size=2][color=Black]
显然是DNA,除非超声,用破碎细菌的强度大概2-3次,你说
2013年04月19日发布人:qiangren789
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1mM的超声破碎液破碎细菌
破碎程序5 S on/5 S off 75%的功率(小探头)
3. 15000G离心15分钟
4. 上清再离心100000 G 45分钟
5. 用超净水清洗离心沉淀表面之后用双向裂解液溶解.处理后直接跑双向
2014年05月08日发布人:bring
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1.我用的安捷伦DB-FFAP的柱子,分析细菌代谢产酸的,我用破碎细菌和正丁醇萃取的方法,请问这种方法合理吗,还有没有更有效的方法?
2.分析有机酸时,有些峰的出峰时间跟我设定的标样不一致,我设定的标样最迟的出峰时间就是16min,而我
2011年07月28日发布人:w79598
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处理后3000g离心30min,上清过柱? 如果是包涵体的话, 不加尿素溶解,能挂到柱子上么?
2. 还有个问题, 如果不加DNase去除DNA,对纯化有影响么? 超声可以裂解DNA么? 请教各位有经验的战友了,过柱前都怎样破碎细菌才能够
2014年07月05日发布人:windboy
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,蛋白才能溶解出来。,你是做微生物天然产物的么?
发酵液离心后上清萃取,沉淀一般不都是加点甲醇或者丙酮超声搅拌在萃取么,这当然要看你用的什么功率。超声可以杀死细菌。超声使菌体破碎,打断核酸。,我没有做过实验,不过我认为小功率
2013年08月31日发布人:翔少爷