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[size=2]向各位请教~
我的基因全长1638左右,分别以DNA和cDNA为模板进行pcr,胶回收,连接19T载体,转化大肠杆菌感受态。
上图是DNA为模板的基因,菌液PCR
送华大测序失败,第一次是原始菌液(命名为D4
2015年01月13日发布人:chuntian1983
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把PET28a转到DH5α里平板培养后挑单克隆过夜培养,菌液pcr检测全是阳性。然后我把培养液每管加至5~6ML(是不是有点多了?)再过夜培养提质粒。提质粒的时候加了3ml菌液,用天根试剂盒提的,回收后竟然浓度超低。还有不到10ng/ul
2016年03月26日发布人:hcy517
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[size=2]这是前段时间跑的菌液pcr,在某几个泳道里隐约有几条带,但是不是很明显,非常的淡,请问,这是不是引物特异性不好的原因啊?[/size],[size=2]修改一下PCR反应条件
最好是退火温度,做个梯度PCR试试
2015年02月15日发布人:bamboo16
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,菌液摇到饱和时总有目的蛋白自动表达的问题,这也是有毒蛋白不能表达的原因),他彻底研究了培养基的每一种组分,最后发现是胰蛋白胨里的少量的乳糖在作怪,他同时又发现了葡萄糖,和氨基酸能抑止乳糖的诱导,在培养基的研究中,他发明了全新的培养基组分,在这种培养基里,菌液的OD值很简单的就能达到5-50左右,在此基础上,他发明
2013年06月01日发布人:mingming0638
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我用pQE30载体表达我的目的片段时发现细菌数量下降,为此,我做了实验进行验证,取转化有目的质粒的M15菌株培养过夜,再取5ml菌液加入到20ml新鲜LB中,振荡培养,3h后(如图所示的0h
2013年11月27日发布人:嗅嗅
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显示出我要的蛋白,老师说我的蛋白之所以没有表达是因为我用试管摇菌,应该用锥形瓶的。她的意思我明白,锥形瓶可以提供更大的细菌生长空间,可是我用试管摇菌,只有5ml的菌液,对蛋白质的表达影响不至于会这么大吧。我怀疑可能是细菌有问题。有经验的大侠请
2014年07月05日发布人:vera+
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我直接用牙签蘸了点菌放在PCR体系里,结果没有P出来,是什么原因啊?[/size],[size=2]
用牙签从平板上挑取单菌落,放入加LB的EP管中,摇菌到一定浓度,然后在取菌液做PCR[/size],[quote
2015年12月30日发布人:蒲公英
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[size=2][color=Black]我现在在做一个蛋白,发现是个可溶性蛋白,老板要求在上清中获得这个蛋白,但是,我用 PEG6000沉淀 1.2000G离心30分钟竟然什么也没有?菌液是500ML,PEG600=35g,请问有什么
2014年01月09日发布人:hustwb
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][color=Black]一、证明目的蛋白有表达
1、挑取一单菌落接种于含氨苄(Amp,终浓度为100g/mL)的3mL液体LB培养基中37℃,250rpm培养过夜。
2、将过夜培养菌液以1:100转接于含上述抗生素的100mL液体LB中
2013年06月01日发布人:箭头儿
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[size=2][b]我的C2z2跑出来了两个条带,上面一条是我的目的片段,怎么回事呢?[/b][/size],[size=2]
你这个是菌液检测吗? 我之前的菌液检测时有一个菌落也出现过类似的情况 怀疑可能是模板污染[/size
2014年10月29日发布人:+小生怕怕+