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用的是PET32载体吧,您的表达载体上应该还含有trombin酶切的位点,EK会非特异性的切割trombin,您Tricine胶14.4-21.5之间的那个酶切后的粗带应该是trx标签,下面的那条带应该是您的目的多肽,在Trx标签和融合蛋白之
2013年11月15日发布人:iii_ii
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干净,理论上酶切后应该有两条带,分别是17.5KD和5.5KD。但是非特异条带很多。另外,用肠激酶附带的对照蛋白尝试切割,结果没有非特异性,比较郁闷。请大家帮忙分析一下! [/font][/color][/size],[size=2
2013年07月27日发布人:如影随形
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[size=3][font=楷体_GB2312][color=Black][b][精华]酶切问题讨论专栏 [转载]
如何选择酶切缓冲液,如何提高酶切效率,尤其是PCR产物的酶切、双酶切、特殊酶切,总结了以下几点,希望对大家
2011年10月07日发布人:3N4G
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[size=3][color=Black][font=楷体_GB2312][b][求助]关于始终存在的非特异扩增
大家好!我有一头疼的问题。我的目的片段210bp,但我无论是提高退火温度,还是改变引物量,模板量,酶量或延长延伸
2011年10月11日发布人:中国特色
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],[size=2]OLIGE。6软件就可以验证引物的特异性。。如果存在同源性你可以BLAST一下。我不知道你的非目的条带是指什么?如果在100BP一下的应该是引物二聚体。。做普通PCR影响不大。。荧光定量的就不能有任何非目的条带。。我建议你提高
2015年06月03日发布人:memory
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我想做做凝血酶在实际体系(即血浆)中检测试验,抽取的血液直接放在肝素钠管中就可以防止凝血了吗?如何从全血中提取血浆,离心的转速和时间应该是多少?得到的血浆应如何保存?放置时间多久血浆会失活?请哪位大神知道呀,多谢了!,血液里加少量柠檬酸
2024年01月01日发布人:娜爷~
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配制1mg/ml的胶原酶溶液是用pbs来配,还是用三蒸水配制,是否可用培养液来配啊[/size],[size=2]应该用PBS或Hanks来配,胶原酶发挥作用需要离子强度和合适PH值,光用三蒸水配不利于酶的活性,培养液
2015年08月11日发布人:子衿青青
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[size=2]在做血清/血浆中miRNA的RT-qPCR时发现目标miRNA可以较好的检测到,但是根据查询后确定的内参RNU6B却没能得到较好的扩增结果,CT值都在35以上。请教有经验的研究者们如何选择血清/血浆miRNA的内参?参照
2015年09月04日发布人:JK.jon
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[size=4][color=Navy][font=楷体_GB2312][求助]DNA Bisulfite处理以及甲基化特异PCR
求助群内有经验者:
在DNA Bisulfite 处理以及甲基化特异PCR的准备工作时候,遇到
2013年03月27日发布人:星星点灯
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[size=4][color=DarkGreen][font=Impact][求助]PCR扩增出非特异带但无特异带,是不是引物的特异性不好?
欲通过RT-PCR检测一种基因的不同剪接异构体表达情况,
在文献(cancer
2011年10月24日发布人:回眸