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方法
3,采用降落PCR
对于楼主的问题,建议采用降落PCR,你的后23个循环,可以每循环降低退火温度0.2-0.3度,或者加大Mg的浓度
此外不要为了加大产量,就轻易的增加摸板用量,有的时候加大摸板用量也有可能抑制PCR,反而降低摸板用量
2016年04月04日发布人:fei1226com
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[size=4][font=黑体][color=DarkGreen]请教:降落PCR [转载]
我连续做了3次降落PCR,主温度是55.6度。第一次从57度降到53度,扩增出三条带,(100多,300-目的条带,400多)回收时
2011年09月22日发布人:小鱼鱼
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方法
3,采用降落PCR
对于楼主的问题,建议采用降落PCR,你的后23个循环,可以每循环降低退火温度0.2-0.3度,或者加大Mg的浓度
此外不要为了加大产量,就轻易的增加摸板用量,有的时候加大摸板用量也有可能抑制PCR,反而降低摸板用量
2016年03月02日发布人:bring
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[size=2]
各位大侠:
1:我最近正在做RT-PCR,可是一直没有结果,有人建议用降落PCR.,请教降落PCR必须与热启动联合才能做吗?如果必须用热启动那普通的Taq酶可以吗?有人说可以在预变性后再加酶,这样做可以吗?
2另外
2016年03月01日发布人:气泡
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[size=2]各位大侠:
1:我最近正在做RT-PCR,可是一直没有结果,有人建议用降落PCR.,请教降落PCR必须与热启动联合才能做吗?如果必须用热启动那普通的Taq酶可以吗?有人说可以在预变性后再加酶,这样做可以吗?
2另外,做
2016年02月10日发布人:hold住
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[size=2]上次pcr没有扩增到目的片段是因为退火温度不对呀!
现在我用降落PCR扩增到了目的基因
1、大家看图,觉得我还需要进一步确定最适的准确的退火温度吗
2014年12月01日发布人:mnstyle
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7-9泳道的程序为:降落PCR:94℃ 1min、57℃ 1min、72℃ 1min,35 cycle,每个循环降低0.5℃。
请大侠帮我分析下失败的原因哟![/font][/size],[size=2][font=Verdana
2015年04月28日发布人:二丫头466
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呢?????
我试了做引物浓度梯度,模板浓度梯度,退火温度梯度,降落PCR也试过了,都不行,不带GC夹的引物几乎都扩出来了!!
今天用DNA模板做不带GC夹子引物的扩增也出不来,我就搞不明白了,引物序列是一样的,怎么这就结合不上去
2016年02月16日发布人:不请自来
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=2]
(1)引物特异性不好
(2)退火温度太低,推荐做个降落PCR
(3)模板用量太大,如果是人基因组的话你扩这么小的片段用个50~100ng足够了
(4)感觉你的胶好像跑的也有些问题[/size],[size=2]
目的条带
2015年04月03日发布人:bgf5
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了,很是郁闷! [/font][/color][/size],[size=4]看来要用降落(TD)-PCR了,就是PCR开始时的退火温度高于Tm值,随着循环的进行,退火温度逐渐降到Tm值并最终低于这个水平。首先在高于引物Tm值的温度扩增几个
2011年10月22日发布人:smile_smile