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空隙,而且比如说样品孔之间也有空隙,这些洞洞并没有填进东西,而抗体也是蛋白,也会被吸附在空的洞里,这样,就会有很多非特异性的信号,但如果用富含蛋白的封闭液与膜作用,那所有的空洞都会被BSA或者酪蛋白填满,这样,抗体蛋白就不会被非特异性的吸附
2013年05月21日发布人:bamboo16
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表达到GST部分就终止,所以26KD左右的杂带是很常见的,那可以选择用不同浓度的还原谷胱甘肽去做阶段洗脱,如果还是分不开,那也许就得选择离子交换或者凝胶过滤等别的分离手段。提高平衡缓冲液中的盐浓度可以降低因为离子作用带来的非特异吸附。在平衡缓冲液中添加0.5%吐温或Triton可
2023年08月30日发布人:3N4G
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。[/color][/size],[size=2][color=Black]
你用5%的脱脂奶粉稀释的二抗直接点到膜上,比较难显色。因为膜对蛋白的吸附是非特异性的,所有蛋白都能结合上去,而你二抗的量相对与5%的脱脂奶粉中的蛋白来说是微乎其微了
2014年04月10日发布人:ha111
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都比较复杂,你用多抗的话可能就会出现非特异性吸附,从而导致出来假阴性结果!,多抗结合位点太多,易产生非特异吸附,即使纯化特异性仍然不如单抗好,非是多抗不好;相对于免疫分析法而言,多抗反而是更好的选择;怪只怪国内多抗的制备技术。,多抗容易出假阳,所以还是建议单的吧!
2015年03月27日发布人:落叶无声
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,都是得不到稳定结果要不全没有,要不全有。wash buffer的选择有什么窍门么?洗的时候也需要什么技巧么?
另外这种偶联beads的抗体是不是也很灵敏?多了就非特异吸附目的蛋白,少了就检测不到,说明书上推荐40ul,我后来
2013年05月10日发布人:niangao1980
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Marker,右边为您纯化的蛋白。
您的目的蛋白上方杂带不多,而下方有好几条粗带,不可能为非特异性吸附,那就是蛋白降解条带,带有His标签,这个是最大的可能
2014年02月08日发布人:kulee
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你可以考虑升高盐的浓度,例如0.5MNacl.[/color][/size],[size=2][color=Black]此外改用不同浓度的咪唑做阶段洗脱,这样也许能分的更好,加300mM的Nacl主要是为降低因离子作用的非特异吸附,此外不少
2014年05月17日发布人:jujuba
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原因,his tag没有暴露在表面是有可能的。
平衡缓冲液中加50mM的NaCl其实不算高的,为了抑制非特异性吸附,通常平衡和洗脱的缓冲液中都加高浓度的NaCl,500mM都没有问题。
除了上述的可能外,你还可以检查一下,是不是Ni柱本身
2014年06月10日发布人:bananapeople
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][/size],[size=2][color=Black]
PVDF膜在甲醇活化后是带电的,因而在转膜时将蛋白吸附。
封闭的目的是将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满,
以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合,产生非特异条带或者是背景
2014年01月19日发布人:applebook=213
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buffer,可以提高HIS的结合效率,对不挂柱和挂柱效率不高的蛋白有特效,也不会增加非特异性吸附,加入的试剂对蛋白有一定的保护作用,不管是变性的还是非变性的都适用,就目前我自己用的效果来说是这样的,如果你愿意试试的话,只要你出运费,我
2014年01月22日发布人:jingling845