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小片段条带。你可以引物浓度不变,降低一下褪火温度。[/size],[size=2]
降低退火温度了,那非特异条带不是会更多的,嘛
而且我也试过。结果没有什么改变啊[/size],[size=2]
降低退火温度了,那非特异条带不是会更多
2015年08月31日发布人:bs4665
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高的原因,你提高点退火温度试试,每2度一个梯度,做个梯度[/size],[quote]原帖由 [i]iii_ii[/i] 于 2015-2-15 17:44 发表 [url=http://bbs.antpedia.com
2015年02月15日发布人:菠萝喵
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accession no.是怎么得到的? [/font][/size][/color],100bp处的是引物二聚体,需要提高退火温度,建议做梯度摸条件。,[color=DarkRed][size=5]100bp一下是引物二聚体,出现的原因可能是1 引物
2011年08月21日发布人:我是一片云
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第三部分设计的GACGTGAGTAGATCGACTCC可以计算出来一个退火温度(52度),根据整个引物计算的温度为(62度)。
由于保护碱基和酶切位点与基因组没有特异性,所以简单的根据整个引物计算的温度设定退火温度会明显的影响我们的PCR
2015年10月07日发布人:bgf5
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95c 30s[/size],[size=2]
我觉得你没有得到扩增曲线可能是跟你的反应程序有关,你的反应程序只有变性和退火两步,没有延伸,产物都没有扩增,荧光信号当然不会增加了.为什么你溶解曲线分析的时候,只做了两个温度呢
2015年10月09日发布人:fox_79
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退火温度,可以增加扩增特异性;
(3)你把你的胶浓度稍微提高点,你Marker的40、60bp的也有些拖带
(4)降落PCR可以增加产量和特异性
希望对你有帮助[/size],[size=2]
可以先做一个梯度PCR,选择好合适的
2015年04月02日发布人:birdfish
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中退火55度 [/size],[size=2]请问:
1、出现条带了,但有拖尾是什么原因;如图4
2、没出现条带或者部分出现模糊条带,但每个样子的电泳路径上有明显的白色是什么原因;如图2和3
3、图1中没有条带,而且明显从梳空开始有
2015年04月29日发布人:bgf5
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偶数列的那些条带阿
帮忙看看
bP数较小的那些条带位求助条带啊 [/b][/color][/font][/size],[size=4]提高一下退火温度,降低引物的量,试一下 [/size],[size=4]提高一下退火温度,降低引物的量
2011年10月04日发布人:zhezhe
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~~~[/size],[size=2]
你的Marker毫不清楚啊,胶没配好吧?至于PCR,大多摸索退火温度就可以了[/size],[size=2]你这根本不是电泳问题,本质上就是没有PCR产物。[/size],[size=2]曝光时间长一点
2015年04月02日发布人:大虾米
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方法
3,采用降落PCR
对于楼主的问题,建议采用降落PCR,你的后23个循环,可以每循环降低退火温度0.2-0.3度,或者加大Mg的浓度
此外不要为了加大产量,就轻易的增加摸板用量,有的时候加大摸板用量也有可能抑制PCR,反而降低摸板用量
2016年04月04日发布人:fei1226com