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[size=4][color=Black][font=楷体_GB2312][b]巧用PCR—复杂质粒构建策略中的PCR应用[转载]
复杂的克隆策略是指在一个载体上进行插入、替换或删除等多次重组操作或根据需要从头构建一个质粒载体等
2011年09月05日发布人:回眸
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指的是否是用真核质粒载体转染细胞,而稳转即要用病毒质粒转染细胞?跪谢!!![/size],[size=2]
瞬时转染是指转染之后几天之内检测目的基因的表达情况;
稳定转染是指转染之后用相应的药物,例如G418, Zeocin, puromycin等处理细胞,获得目的基因稳定表达的细胞。一般周期比较长,至少需要6~8周。
稳定转染
2015年08月10日发布人:11_hjx
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[size=4][color=Black][font=黑体][求助]PCR纯化的问题,谢谢!
我想把PCR产物连接到质粒载体上,有一些PCR纯化的问题想请教大家:
(1)作为PCR模板的质粒和最终要连接的载体有相同的抗性
2011年10月19日发布人:xyw5
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[size=2]
请教各位大侠:
细胞转染的机制是什么,为什么要先把目的基因连接到质粒载体上呢?很急:)
谢谢![/size],[size=2]这样目的基因才能转进细胞并表达.[/size],[size=2]请问我想知道转染
2014年12月04日发布人:moonlight45
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可以问问:普如汀生物技术(北京)有限公司。不过得将近4万块钱吧。[/size],只是载体4万多吧,phh12.4,lonza的早期版本。而且应该无法授权生产,[size=2]
仔细查找了下信息,好像那个什么“中国质粒载体菌株细胞株基因保藏
2014年08月09日发布人:ladyhuahua
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[size=2][color=Black][font=黑体]
已经用pQE30构建了一个重组质粒,选择的是BamHI 和Sal I两个酶切位点(因为目的片段上只有这两个酶切位点没有),但重组成功后蛋白不能表达,欲重新选择载体构建质粒
2014年06月10日发布人:987789
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测定,只有转化率测定。
转化:指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
建议用G418筛选,挑取单克隆,扩大培养得到转染质粒的稳定细胞系[/size
2012年05月29日发布人:8princess8
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[size=2][color=Black][font=黑体]
各位战友,老师,最近我用TOP10菌表达已构建好的重组质粒,表达载体是pBAD载体,已测序过,序列正确(包括载体上与目的基因5',3'相连的一部分).诱导表达后做
2014年02月12日发布人:yyaxw84
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[size=2][color=Black][font=黑体]各位老师,我将目的片段转到载体上后,双酶切没有结果,但是PCR有结果,这是什么问题呢?
在转化克隆载体,提质粒,酶切有结果,然后回收纯化目的片段,连到表达载体上就出现了上述问题
2014年05月20日发布人:大白菜
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它能减少上述因素的不利影响,提高蛋白的稳定性,而事先装配于载体上的表达产物往往成为蛋白纯化的标记,由此方便了特异蛋白质的表达与提纯。
澳大利亚Simth和Johnson构建了PGEX质粒,他们在载体上接上了寄生蠕虫
2013年07月26日发布人:zwsyrt