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我提的是肾脏组织蛋白总蛋白,目的蛋白为核蛋白PCNA,用的是国产的PIRA裂解液,去污剂为PMSF,具体步骤为:
取少量组织,液氮研磨,加100UL (PIRA:PMSF=9:1),四度冰箱
2013年12月23日发布人:qqshepherd
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次了,没有结果。我把我的步骤给您看一下,请您帮忙分析一下,谢谢。
1) 取老鼠大脑组织用细胞裂解液(买的,含PMSF,磷酸酶酶抑制剂),冰上研磨,研磨后,在15000*6min, 4℃,取上清,分装,放于-80°冰箱保存
2) 跑
2013年08月03日发布人:yapuyapu
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=Black]MBP特异性很好,所以感觉像是降解了
破菌的时候有没有加EDTA, PMSF之类的蛋白酶抑制剂?[/color][/siz
2013年10月07日发布人:changlhsyo
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重悬后37℃水浴30min,取样电泳,蛋白条带有3条,即蛋白被降解;
注:1、2菌悬液中均加了1mM的PMSF、5mMEDTA、2mMβ巯基乙醇。
3.综上,决定采用变性纯化法,即先用含8M尿素的缓冲液充分重悬菌体,超声破菌,去上清及
2014年01月06日发布人:superboy
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最近在做p-AKT1,实验室用的蛋白裂解液是MILIPORE的RIPA裂解液,用的时候我还加了PMSF,但是疑惑的是,它是否含有磷酸酶抑制剂?p-AKT1抗体用的是SANTA的,每次出来只有
2013年05月16日发布人:glass
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10000rpm,4℃ 离心 30min。
4、收集所得上清液即为膜组份。
Buffer A:0.32M 蔗糖,5mM Tris-HCl(PH 7.5),120mM KCl,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml
2014年05月29日发布人:dongdongqiang
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]
呵呵,我也和你一样。
我的试剂大部分是从生工买的,好像还可以。
关于裂解液,分子克隆上的配方很好,不过象 PMSF比较贵。[/color][/size],[size=2][color=Black]
怪了,生工的东西,在我们这里,就没有没问题的,都有问题。
有时还不如自己动手配的呢,那帮人不知天天搞什么。[/
2013年06月20日发布人:12xunmei
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%NP-40,(较温和)
1 mmol/L DTT,
0.1 mmol/L PMSF,
1 mg/L Leupeptin、aprotinin和pepstatin)
混匀后冰置15 min,
剧烈震荡15 s,13 000
2014年04月16日发布人:mod=8048
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,一半装2-2.5小时。但是结果不是背景强就是没东西。而且经常有黑点。
方法4 免疫印迹
1样品制备和蛋白定量
1.1 容液配制
10ml100mmol/L PMSF:0.1742g溶于10ml的异丙醇中,至与
2013年05月20日发布人:woshituzhu
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),120mM KCl,1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。冰上预冷。
Buffer B:20mM HEPES
2013年06月04日发布人:nikun230